Zellulärer und molekularer Bildgebungskern

Die Mission der Cellular and Molecular Imaging (CMI) Core Facility des Integrative Neuroscience COBRE Center besteht darin, die Infrastruktur und Ressourcen bereitzustellen, die für die Durchführung der zellulären und molekularen Bildgebung von Biomolekülen sowie für die Medienvorbereitung für die weitere Forschung an der University of Nevada, Reno, erforderlich sind ( UNR). Die Core-Einrichtung befindet sich im dritten Stock des Fleischmann Lifesciences-Gebäudes in der Biologieabteilung des College of Science.

Die CMI Core-Einrichtung bietet Zugang zu hochmodernen Instrumenten, darunter ein neues Zwei-Photonen-Bildgebungssystem Scientifica HyperScope für das Scannen tiefer Gewebe in lebenden Gehirnen und ganzen Tieren sowie ein konfokales Leica SP8-Mikroskopsystem, das mit einem LIGHTNING ausgestattet ist und die Erfassung von ermöglicht zelluläre Details und beobachten Dynamik mit einer Auflösung von bis zu 120 nm, ein Leica Thunder 3D Tissue Aufrechtmikroskop, ein Leica Thunder Model Organism Stereomikroskop zur Abbildung von Embryonen, Organen und kleinen Organismen wie Drosophila und C. elegans, ein GE Phosphoimager für Northern Blotting , ein BioRad ChemiDoc für Western Blotting, zwei BioRad Real-Time PCR-Instrumente für präzise und quantitative PCRs, ein QIAgility für den automatisierten PCR-Aufbau, ein GeneSys 180 UV/Vis-Spektrophotometer und ein Quibit 4 Fluorometer.

Zu den weiteren Fähigkeiten des Kerns gehören Medienvorbereitungsgeräte und Ressourcen für die Haltung von Drosophila und C. elegans, die als Modellorganismen verwendet werden.

Standort: FA 318 (Zugang mit Türschlüssel erforderlich)

Die Zwei-Photonen-Mikroskopie ist zu einem unverzichtbaren Werkzeug für die zelluläre Neurowissenschaft geworden und ermöglicht die hochauflösende Fluoreszenzbildgebung von Zellen in vitro und in vivo, lebendem Gehirn und ganzen Tieren. Das HyperScope-System ist ein speziell angefertigtes Zwei-Photonen-Mikroskop, das mit einem breit abstimmbaren Ti-Saphir-Laser (690–1040 nm) von Mai-Tai eHPDS und mehreren Objektiven (16x, 20x und 40x) ausgestattet ist und auf einem Thorlabs-Steckbrett steht Antivibrationstisch. Mit der Scientifica SciCam Pro CCD-Kamera ist es möglich, funktionale Bildaufnahmen mit Videobildraten von 24 fps (volle Auflösung) und 40 fps (binned 2 x 2) durchzuführen. Die Detektorbaugruppe umfasst ein rotverschobenes PMT- und ein GaAsP-PMT-Modul sowie Epifluoreszenzbildgebung mit Filtersätzen für GFP (470/40x Extinktion, 525/50m Emission) und mCherry (560/40x Extinktion, 630/75m Emission). Die Scanspiegel im Bildgebungspfad können je nach Bedarf in mehreren Konfigurationen angeordnet werden. Bei bis zu 3 Spiegeln in Reihe können Sie zwischen Galvo/Galvo- (GG), Resonant-/Galvo- (RG) oder Resonant-/Galvo-/Galvo-Anordnungen (RGG) wählen. Das Mikroskop ist mit einem extrem sanften Z-Achsen-Antrieb ausgestattet, um eine vibrationsfreie Bewegung zu gewährleisten. Die Z-Achse wird mit einer Software gesteuert, um Z-Stapel mit einer Mindestschrittgröße von 0,1 mm zu erfassen. Durch die Hinzufügung eines Piezo-Z-Achsen-Objektivpositionierers ist eine Volumenbildgebung bis zu 400 mm möglich. Das Mikroskop kann einfach konfiguriert und zwischen In-vitro- und In-vivo-Anwendungen umgeschaltet werden, indem die Untertischoptik und der Steigblock entfernt werden. Das System ist in einem Verdunkelungskäfig untergebracht, um eine Licht- und Lärmbelästigung biologischer Proben zu verhindern.

Diese Plattform umfasst eine preisgekrönte SciScan-Erfassungssoftware von Scientifica, die es Benutzern ermöglicht, SciScan problemlos in benutzerdefinierte Anwendungen wie LabView und ScanImage zu integrieren. Die von Scientifica verwendete ScanImage-Softwareschnittstelle (Vidrio Technologies) wurde von HHMI Janelia Farm speziell für neurowissenschaftliche Anwendungen entwickelt und gilt als die fortschrittlichste Software für Zwei-Photonen-Laserscanning auf dem Markt.

Zu den wichtigsten Alleinstellungsmerkmalen des Scientifica HyperScope gehören:

Standort: FA 324

Das konfokale Leica TCS SP8 LIGHTNING ermöglicht die Extraktion von Bildinformationen mit hochauflösender Erfassung, die die laterale Subbeugungsauflösung der konfokalen Mikroskopie nutzt. Es ermöglicht die Erfassung zellulärer Details und die Beobachtung der Dynamik mit einer Auflösung von bis zu 120 nm, was den Fähigkeiten eines hochauflösenden STED-Mikroskops nahekommt. Der aufrechte Konfokal ist in der Lage, mithilfe mehrerer Laserlinien (Diode 405, Blau 488, Grün 552, Rot 638 nm) gleichzeitig von bis zu drei Detektionskanälen (zwei PMTs, ein HyD) zu erfassen. Der Konfokal ist mit einem herkömmlichen Tandemscanner (8 kHz), einem Super-Z-Galvo-Tisch Typ S, mehreren Objektiven (10x, 20x, 25x, 40x, 63x) konfiguriert und steht auf einem Antivibrationstisch. Das Konfokal ist an einen Computerarbeitsplatz angeschlossen, der mit der Leica LAS-X-Software und einem 30-Zoll-Monitor ausgestattet ist.

Zu den Hauptmerkmalen des Konfokals gehören:

Standort: FA 324

Bei den THUNDER-Imagern handelt es sich um eine brandneue Klasse hochauflösender Weitfeldmikroskope mit rechnergestütztem Clearing, die exklusiv von Leica Microsystems entwickelt wurden. Diese Bildgeber können scharfe Daten und qualitativ hochwertige Bilder erfassen, indem sie unscharfe Unschärfen oder Trübungen, die bei dicken 3D-Proben auftreten, die im Allgemeinen mit der Weitfeldmikroskopie erfasst werden, sofort entfernen. Mit der neuen LAS-X-Navigator-Software verkürzen diese Imager außerdem den Bildgebungs-Workflow von der Bildaufnahme bis zur Datenanalyse erheblich. Der THUNDER Imager 3D Tissue ist ein motorisiertes aufrechtes Mikroskop, das mit einer ultraschnellen DFC 9000 GT/C-Kamera ausgestattet ist und sich ideal für Zellkulturen, Gewebe, fixierte Proben und gereinigtes Gewebe eignet. Das THUNDER Imager Model Organism ist ein M205 FCA-Stereomikroskop zur Abbildung von Embryonen, ganzen Organen und kleinen Organismen.

Zu den Hauptmerkmalen des THUNDER 3D-Gewebebildgebers gehören:

Zu den Hauptmerkmalen des THUNDER Model Organism Imagers gehören:

Standort: FA 312 (Gemeinsamer Kern-/Geräteraum, Türcode-Zugang erforderlich)

Der Typhoon Phosphoimager ist ein schneller und vielseitiger Laserscanner für empfindliche und quantitative Messungen radioisotrop markierter Proben. Der Typhoon ist ein nicht-konfokaler Laserscanner mit variablem Modus, der hohe Geschwindigkeit und Auflösung für die präzise Quantifizierung von Proteinen, Nukleinsäuren und anderen Biomolekülen bietet. Der Scanner umfasst eine „filmlose“ Autoradiographie mit Speicherleuchtstoffschirmen. Der Laser kann 16-Bit-Bilder mit einer Pixelauflösung von bis zu 25 μm erzeugen, um eine präzise Quantifizierung in Gelen und Blots zu ermöglichen, mit einer hohen Geschwindigkeit, um Gele von bis zu 240 x 250 mm in weniger als 2 Minuten zu scannen. Für die Autoradiographie stehen zwei Leuchtstoffschirme mit einer Größe von 200 x 250 mm zur Verfügung. Der Scanner kann ein breites Spektrum an Isotopen in radioaktiv markierten Proben erkennen. Direkt neben dem Phosphoimager-System befindet sich ein PC-Computer mit einem Softwarepaket, das die quantitative und qualitative Analyse von Bildern und Daten vor Ort ermöglicht.

Zu den Hauptmerkmalen des Typhoon-Imagers gehören:

Standort: FA 312 (Gemeinsamer Kern-/Geräteraum, Türcode-Zugang erforderlich)

Das Biorad Chemidoc ist ein einfaches, leistungsstarkes Gel- und Blot-Bildgebungssystem zur genauen Quantifizierung von Proteinproben in Gelen und Membranen. Das Chemidoc optimiert das Western-Blotting in einem fünfstufigen Ansatz, indem es traditionelle Blotting-Techniken mit innovativen Werkzeugen kombiniert, um eine verbesserte Bandenquantifizierung und eine schnelle Beurteilung der Elektrophoreseergebnisse und der Blot-Transferqualität vor dem Western-Blotting zu ermöglichen. Der Chemidoc ermöglicht schnelle Western-Blot-Ergebnisse in nur 15 Minuten mit effizientem Proteintransfer in 3 Minuten und fleckenfreier Gelbildgebung in 5 Minuten. Die integrierte Software umfasst alle Werkzeuge zur quantitativen und qualitativen Bild- und Datenanalyse. Mit dem ChemiDoc aufgenommene Bilder können auch direkt ausgedruckt werden.

Zu den Hauptmerkmalen des ChemiDoc-Systems gehören:

Standort: FA 314 (Einrichtung für Gewebekultur, Zugang per Türcode erforderlich)

Das Trans-Blot Turbo-Transfersystem kombiniert traditionelle Blotting-Techniken mit modernem Filterpapier und Puffern und ermöglicht so einen schnellen Proteintransfer von Gelen zu Membranen bei minimaler Vorbereitungszeit. Das System integriert ein Netzteil mit hoher Stromstärke, das den Strom zwischen einer eingebauten platinierten Titananode und einer Edelstahlkathode leitet.

Zu den Hauptmerkmalen des Turbo-Blotters gehören:

Standort: FA 313 (Autoklavenraum)

Der Integra-Medienautoklav ermöglicht die schnelle und schonende Zubereitung von 1-10 Liter Kulturmedium. Präzise Kontrolle von Temperatur, Zeit und Druck während des Sterilisationsprozesses garantieren eine gleichbleibend hohe Qualität. Der Mediaclave kann zur Vorbereitung und Sterilisation zahlreicher Arten von Kulturmedien verwendet werden, einschließlich Medien für die C. elegans-Forschung. Die breite Zugabeöffnung erleichtert die sichere Zugabe von Nahrungsergänzungsmitteln vor der Abgabe. Der Mediaklav ist mit einer Peristaltikpumpe verbunden, die in einer Vertikalfluss-Workstation untergebracht ist, um Petrischalen und Fläschchen zu füllen.

Zu den Hauptmerkmalen des Mediaclave gehören:

Standort: FA 312 (Gemeinsamer Kern-/Geräteraum, Türcode-Zugang erforderlich)

Zwei Biorad-Echtzeit-PCR-Geräte kombinieren fortschrittliche optische Technologie mit präziser Temperaturkontrolle, um eine empfindliche, zuverlässige Erkennung, schnelle Einrichtungsläufe und die Überwachung von Amplifikationsspuren in Echtzeit auf dem integrierten LCD-Touchscreen zu ermöglichen. Direkt neben den beiden qPCR-Detektionssystemen befindet sich ein PC-Computer mit einfach zu bedienender Software zur Vor-Ort-Analyse von qPCR-Daten.

Zu den Hauptmerkmalen des CFX96 gehören:

Standort: FA 312 (Gemeinsamer Kern-/Geräteraum, Türcode-Zugang erforderlich)

Das QIAgility ist ein kompaktes Tischgerät, das eine schnelle und hochpräzise Einrichtung von PCR-Experimenten mit gebrauchsfertiger Software für einfache und bequeme Nutzung ermöglicht. Die Software bietet eine Schritt-für-Schritt-Anleitung für die Einrichtung des Arbeitstisches und die automatische Berechnung aller Mischungen, sodass keine Pipettierschritte programmiert werden müssen. Wählen Sie einfach das Kit und den Cycler aus, definieren Sie Ihre Ziele und starten Sie den Lauf. Für zusätzliche Flexibilität wird das QIAgility über einen Laptop-Computer bedient.

Zu den Hauptmerkmalen des QIAgility gehören:

Standort: FA 312 (Gemeinsamer Kern-/Geräteraum, Türcode-Zugang erforderlich)

Das GeneSys-Spektrophotometer führt quantitative UV-Vis-Messungen mit hohem Durchsatz durch, bei denen ein Doppelstrahl als Referenzzellposition erforderlich ist. Dieses für Benutzerfreundlichkeit und Leistung optimierte System verfügt über einen hochauflösenden Farb-Touchscreen und optionale Wi-Fi-Netzwerkanbindung. Das Fach ist ein 8-Positionen-Zellenwechsler (Standard).

Zu den Hauptmerkmalen des GeneSys 180 UV/VIS gehören:

Standort: FA 314 (Einrichtung für Gewebekultur, Zugang per Türcode erforderlich)

Das Qubit 4 Fluorometer misst die DNA-, RNA- und Proteinmenge genau. Zusammen mit einem RNA-IQ-Assay-Kit kann der Qubit in nur zwei einfachen Schritten intakte von degradierter RNA genau unterscheiden. Bei allen Qubit-Assays wird die Konzentration oder Qualität des Zielmoleküls in der Probe durch einen fluoreszierenden Farbstoff angezeigt, der nur dann ein Signal aussendet, wenn er an das Ziel gebunden ist, wodurch die Auswirkungen von Verunreinigungen auf das Ergebnis minimiert werden. Die benutzerfreundlichen Touchscreen-Menüs erleichtern die Auswahl und Durchführung der benötigten Tests. Die Ergebnisse werden in nur wenigen Sekunden angezeigt.

Zu den Hauptmerkmalen des Qubit 4 Fluorometers gehören:

Ein Labor-/Kerntechniker (tbd) im Personal bietet grundlegende Schulungen und technische Unterstützung, um Forscher mit all unseren Geräten und Software zu unterstützen. Für Informationen zum Kern wenden Sie sich bitte an den Kerndirektor Alexander van der Linden, Ph.D. unter [email protected].

Für konfokale und Zwei-Photonen-Bildgebung:

Für molekulare Bildgebung und Zubehör: